脂质组学是代谢组学中非常重要的分支，主要研究脂肪酸、甘油脂、磷脂、鞘脂、胆固醇酯、胆汁酸、氧化脂质、酰基肉碱等脂质分子的组成、含量和变化规律。由于脂质分子种类多、结构相似、异构体复杂、离子化效率差异明显，脂质组学实验比普通小分子代谢组学更依赖标准品和同位素内标。

在 LC-MS/MS 或高分辨质谱脂质组学实验中，标准品主要用于确认保留时间、优化质谱参数、建立标准曲线、判断碎片离子和辅助定性；同位素内标主要用于校正提取损失、基质效应、进样误差和仪器响应波动。Lipidomics Standards Initiative 建议，脂质定量中内标应尽量在脂质提取前加入，并且至少每个脂质类别配置一个合适内标，理想内标应与目标脂质结构相似、碳链长度和双键数量接近，并与目标物同时离子化；结构完全一致的稳定同位素标记物通常被认为是理想选择。

一、脂质组学为什么必须重视标准品？

脂质组学不像单一化合物检测。一个样本中可能同时存在上千种脂质分子，例如 PC、PE、PI、PS、PG、LPC、LPE、TG、DG、CE、Cer、SM、HexCer、FFA、胆汁酸、氧化脂质等。它们在结构上高度相似，但在质谱中响应差异很大。

如果没有标准品和内标，脂质组学容易出现以下问题：

因此，脂质组学中的标准品选择，不只是“有没有这个产品”，而是要看它能不能覆盖目标脂质类别、能不能代表相近碳链结构、能不能用于定性或定量。

二、脂质组学标准品分为哪几类？

1. 定性标准品

定性标准品主要用于确认目标脂质的保留时间、母离子、子离子和碎片规律。尤其是同分异构体、位置异构体和双键异构体较多的脂质类别，更需要标准品辅助确认。

适用场景：

2. 定量标准品

定量标准品用于建立标准曲线，适合靶向脂质组学或重点脂质分子的绝对定量。例如胆汁酸谱、游离脂肪酸谱、酰基肉碱谱、神经酰胺谱、胆固醇及胆固醇酯分析等。

Avanti/LIPID MAPS 相关标准体系中也强调，质谱研究中要准确识别结构或确定脂质分子浓度，需要使用定义明确的内标或标准品，覆盖甘油脂、甘油磷脂、鞘脂、固醇等主要脂质类别。

3. 同位素内标

同位素内标是脂质组学定量中最关键的一类标准品。它通常是目标脂质或同类脂质的氘代、C13 或其他稳定同位素标记形式，在质谱中与未标记目标物质量数不同，但提取行为和离子化行为相近。

常见同位素内标包括：

商品化脂质组学混合内标也很常见，例如 SPLASH™ LIPIDOMIX™ 这类预混合内标体系，其特点是包含多个主要脂质类别的氘代脂质，并按接近人血浆脂质水平的比例配置，可作为脂质组学 LC-MS 分析的通用内标方案之一。

三、脂质组学标准品选择原则

1. 按脂质类别配置，而不是只选一个内标

脂质组学不能只用一个内标校正所有脂质。PC、PE、TG、Cer、SM、CE、FFA、胆汁酸、酰基肉碱的结构差异非常大，提取效率和离子化效率不同。更合理的做法是：每个脂质大类至少配置一个代表性内标。

建议覆盖：

2. 碳链长度和双键数量要接近

脂质响应受碳链长度和双键数量影响明显。如果目标物是 PC 16:0/18:1，内标最好选择结构接近的 PC 内标，而不是用一个完全不相关的脂类去校正。

例如：

3. 内标应在脂质提取前加入

脂质样本常经历蛋白沉淀、液液萃取、MTBE 提取、Folch 提取、Bligh-Dyer 提取、氮吹浓缩和复溶等步骤。如果内标在提取后才加入，就无法校正提取损失。因此，脂质组学内标通常建议在样本提取前加入。

4. 标准品储存要特别注意氧化和吸附

脂肪酸、磷脂、鞘脂、氧化脂质和多不饱和脂质容易受到光照、氧气、温度和反复冻融影响。建议低温、避光、分装保存；多不饱和脂肪酸和氧化脂质尽量减少空气暴露。

5. 绝对定量需要标准曲线

同位素内标可以校正响应波动，但如果要得到准确浓度，仍然建议使用目标物标准品建立标准曲线。对于重点脂质，如胆汁酸、神经酰胺、游离脂肪酸、酰基肉碱、胆固醇和胆固醇酯，建议采用“标准曲线 + 同位素内标”的方式。

四、不同实验方向的标准品选择建议

五、技术支持总结

脂质组学实验中，标准品的选择直接影响脂质定性、定量和结果解释的可靠性。由于脂质分子类别多、结构相似、离子化效率差异大，不能简单使用一个通用内标校正全部脂质。更合理的方案是根据脂质类别、碳链长度、双键数量、样本类型和研究目的，配置相应的未标记标准品和稳定同位素内标。

对于常规脂质组学实验，建议至少覆盖游离脂肪酸、甘油脂、磷脂、溶血磷脂、鞘脂、胆固醇酯、胆汁酸和酰基肉碱等类别。对于靶向定量实验，应优先使用目标物对应标准品建立标准曲线，并使用结构相近或同位素标记内标进行校正，从而提高数据的准确性、重复性和批间可比性。